Запліднення яйцеклітин in vitro і культивування ембріонів (ембріологічний етап ЗІВ)

Після пункції фолікулів фолікулярна рідина, що містить яйцеклітини, негайно передається в ембріологічну лабораторію, де її досліджує ембріолог під мікроскопом, відбираючи яйцеклітини. Яйцеклітини оточені маленькими трофічними клітками кумулюса, які живлять яйцеклітину. Кожен такий комплекс яйцеклітини з кумулюсними клітинами промивається в спеціальному середовищі, і потім оцінюється зрілість яйцеклітин. Потім їх поміщають в спеціальне живильне середовище і переносять в інкубатор, де вони чекають запліднення сперматозоїдами.


Під час проведення пункції фолікулів у жінки, її чоловік збирає сперму шляхом мастурбації в спеціальний нетоксичний стерильний контейнер. Деякі чоловіки зазнають великих труднощів при зборі сперми в певний час через величезний стрес і «обов'язковість виконання». Про це вони повинні попередити лікаря заздалегідь. Такі чоловіки можуть вдатися до попередньої кріоконсервації (заморожування) сперми, яка потім може бути розморожена в день пункції фолікулів дружини і використана в циклі ЗІВ. Сперма також може бути зібрана під час статевого акту, але лише в спеціальний стерильний нетоксичний для сперми контейнер, який можуть вам видати в медичному центрі "Інтерсоно". Існує велика кількість чинників при зборі сперми, що роблять помітний вплив на її якість. Тому в нашій клініці розроблена спеціальна інструкція для чоловіків по підготовці і збору сперми, з якою пацієнт знайомиться заздалегідь перед початком програми ЗІВ.

Після збору сперми сперматозоїди відмиваються від сім’яної рідини за спеціальною технологією, яка дозволяє відібрати найбільш рухливі і морфологічно нормальні сперматозоїди. Певну кількість рухливих сперматозоїдів (зазвичай 100000 сперматозоїдів/мл) змішують з яйцеклітинами (цю процедуру називають «заплідненням в пробірці» або інсемінацією in vitro, увага – не плутати з внутріматковою інсемінацією) і поміщають в інкубатор. Проникнення сперматозоїда в яйцеклітину, як правило, відбувається протягом декількох годин. Запліднення зазвичай проводять через 2-6 годин після пункції фолікулів.

В інкубаторі підтримується постійний рівень вуглекислого газу, температури і вологості. Умови в інкубаторі і склад поживного середовища відтворюють умови у фаллопієвих трубах, створюючи ембріонові максимально можливі сприятливі умови культивування in vitro. Поживне середовище є вільним від важких металів і містить такі інгредієнти, як білки, амінокислоти, піруват, солі, цукор, і PH-буферну систему, що створюють оптимальні умови для зростання і розвитку ембріона – це для нього свого роду «поживний бульйон».

Коли з різних причин очікується низький відсоток запліднення при стандартній процедурі ЗІВ (наприклад, при малій кількості рухливих сперматозоїдів в еякуляті або низькому відсотку запліднення в попередній спробі ЗІВ), використовуються спеціальні методи мікроманіпуляцій. Інтрацитоплазматична ін'єкція сперматозоїда (ІКСІ – транслітерація від англійського скорочення ICSI) - найбільш часто використовуваний метод – це процедура, при якій одиничний сперматозоїд вводиться безпосередньо в яйцеклітину для її запліднення.


Через 18 годин після додавання сперматозоїдів до яйцеклітин або ІКСІ ембріолог перевіряє, скільки яйцеклітин нормально запліднилися. Яйцеклітина (зигота), що нормально запліднилася, є у цей момент однією клітиною з двома пронуклеусами. Пронуклеуси схожі на маленькі прозорі бульбашки усередині клітини, і один з них несе генетичний матеріал батька, а другий - матері. Коли вони зіллються, утворюється нове життя з унікальним генетичним набором. Яйцеклітини з аномальним заплідненням (наприклад, ті що містять три пронуклеуси), а також яйцеклітини, що не запліднилися, надалі не використовуються.

Відсоток яйцеклітин, що нормально запліднилися, - це біологічна змінна, яку наука, на жаль, все ще не може повністю контролювати. В деяких випадках, навіть коли яйцеклітини і сперматозоїди виглядають абсолютно нормально, запліднення взагалі не відбувається. Проте, як правило, від 50% до 90% зрілих яйцеклітин нормально запліднюються після in vitro або ІКСІ. Нижчий відсоток запліднення спостерігається у тому випадку, коли сперматозоїд або яйцеклітина морфологічно поганої якості, а повна відсутність запліднення може бути пов'язана з генетичною патологією сперматозоїдів або яйцеклітин.

Яйцеклітини (зиготи), що нормально запліднилися, продовжують культивувати далі; вони починають дробитися, і їх якість оцінюють ще через 24 години. Ембріони оцінюють на підставі їх зовнішнього вигляду і швидкості дроблення. Ембріони хорошої якості діляться досить швидко: через два дні після запліднення нормальні ембріони мають 2-4 клітини приблизно рівного розміру з прозорою цитоплазмою і відсутністю фрагментації клітин.

   Підготовка до ЗІВ

   Опис програми ЗІВ

     Запліднення ін вітро (ЗІВ)

     Стимуляція суперовуляції

     Препарати, що використовують в програмах ДРТ;

     Здобуття яйцеклітин

     Запліднення яйцеклітин in vitro і культивування ембріонів (ембріологічний етап ЗІВ)

     Перенесення ембріонів в порожнину матки

     Після ЗІВ

   Причини невдач ЗІВ

   Аналіз невдалого циклу ДРТ